实验四 脂质的薄层层析

【原理】

由于硅胶G对各种不同脂质的吸附能力不同，故用硅胶G做成薄板，以石油醚-丁酮-乙酸的混合液为展开剂，对食用油进行层析，能使各组分分离，并以标准物作对照，显色后，比较它们的Rf值，即可鉴定其成分。

显色剂中的过氯酸能与脂质中不饱和键作用，生成醛类物质。后者能使磷钼酸还原生成蓝色的钼蓝。

【操作】

（1）薄板制备：称取硅胶G1.5g置于研钵中加入蒸馏水5mL。研匀后迅速倒于6cm×15cm玻片上，晃动玻片，使其均匀分布。待凝固后，置110℃烘箱中烘干备用。

（2）点样：用毛细玻璃管分别吸取各种脂质的标准液及试样液各少许，在距层析薄板一端1.5cm的起点线处，间距1cm分别点样。点样的直径应小于3mm，记录各样品的排列位置，待样品的溶剂蒸发后再展开。

（3）展开：以石油醚-丁酮-乙酸（95∶4∶1）为展开剂。把已点好样品的薄板30°倾斜于层析缸中，展开剂的高度必须在薄板点样的起点线以下。密闭层析缸，让其展开。

（4）待展开剂的前沿上升到距薄板顶端1cm处，取出薄板，并于展开剂到达处作一记号，将薄板于室温干燥10分钟后置80℃烘箱中烘干。

（5）显色：薄板烘干后，喷以磷钼酸显色剂，即可呈现蓝色斑点。

（6）求出各点的Rf值：。

【试剂】

（1）硅胶G。

（2）展开剂：石油醚（沸点60～90℃）-丁酮-乙酸（体积之比为95∶4∶1）。

（3）胆固醇甘油酯标准液（1g/L）。

（4）三油酸甘油酯标准液（1g/L）。

（5）卵磷脂标准液（1g/L）。

（6）油酸标准液（1g/L）。